CGT既細(xì)胞與基因治療是利用基因治療載體將外源的治療性基因轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞，再通過外源基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，改變細(xì)胞原有基因表達(dá)以治療疾病的方法。細(xì)胞基因治療是繼小分子、大分子靶向療法之后的新一代精準(zhǔn)療法，在生物醫(yī)藥領(lǐng)域尤其是癌癥及遺傳病治療領(lǐng)域極具發(fā)展前景。

截止至2023年8月，FDA批準(zhǔn)的CGT產(chǎn)品已有32種。國家藥監(jiān)局已批準(zhǔn)100余個(gè)細(xì)胞和基因治療產(chǎn)品開展臨床試驗(yàn)。但是CGT作為新一代生物技術(shù)革命產(chǎn)物，一個(gè)痛點(diǎn)是生產(chǎn)成本非常高，相應(yīng)而生的降低CGT相關(guān)終端產(chǎn)品的成本也是讓CGT更好造福人類的關(guān)鍵。Polyplus致力于為客戶提供從原料質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染試劑、人力成本、儀器設(shè)備等多層面降低成本的高性價(jià)比轉(zhuǎn)染試劑。

大規(guī)模病毒生產(chǎn)的金標(biāo)準(zhǔn)

Polyplus——PEIpro?

PEIpro?特點(diǎn)

l  兼容多種細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)和商業(yè)化培養(yǎng)基；

l  DNA用量更少，經(jīng)濟(jì)高效大批量生產(chǎn)病毒載體；

l  三個(gè)質(zhì)量等級的產(chǎn)品適合各個(gè)階段的應(yīng)用需求，擁有完全GMP等級的產(chǎn)品；

l  基于PEI優(yōu)化的轉(zhuǎn)染試劑，適合貼壁和懸浮系統(tǒng)的LV、AAV、RV等多種病毒大規(guī)模生產(chǎn)。

1、適用于多種細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)

無論基于細(xì)胞培養(yǎng)的系統(tǒng)和生產(chǎn)規(guī)模如何，對于慢病毒和AAV, PEIpro?和PEIpro?-HQ的有效病毒載體產(chǎn)量分別優(yōu)于10⁷IG/mL和10⁹vg /mL。

2、低量DNA生產(chǎn)高量病毒

與另一種基于PEI的試劑和磷酸鈣轉(zhuǎn)染相比，PEIpro?用更少的試劑和更低的DNA量產(chǎn)生更多的病毒。將HEK-293懸浮細(xì)胞以1 × 10⁶/ml的濃度接種于無血清培養(yǎng)基中，按照推薦方案用PEIpro?、和另一種基于PEI的試劑轉(zhuǎn)染。AAV-2使用無輔助包裝系統(tǒng)生產(chǎn)，轉(zhuǎn)染72h使用GFP報(bào)告基因表達(dá)測量病毒滴度。右圖：在無血清培養(yǎng)基中生長的貼壁HEK-293細(xì)胞中產(chǎn)慢病毒，每75cm2燒瓶用15ugDNA和30ul PEIpro?，轉(zhuǎn)染48h后通過滴定上清液測定病毒產(chǎn)量。

3、更少的試劑用量

與其他PEI相比，PEIpro?所需試劑較少，DNA用量也較低。將HEK-293懸浮細(xì)胞以1 × 10⁶/ml的濃度接種于無血清培養(yǎng)基中，用PEIpro?、PEI MAX?和L-PEI 25 kDa轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染48 h后用常規(guī)熒光素酶法檢測熒光素酶的表達(dá)。

懸浮培養(yǎng)體系中用于生產(chǎn)rAAV的新一代轉(zhuǎn)染試劑

Polyplus——FectoVIR?-AAV

FectoVIR?-AAV特點(diǎn)

l  有GMP級別產(chǎn)品；

l  合成型，不含任何動(dòng)物源成分；

l  在懸浮細(xì)胞體系中達(dá)到驚人的病毒產(chǎn)量；

l  適合大規(guī)模生產(chǎn)，轉(zhuǎn)染復(fù)合物工作體積小、更穩(wěn)定；

l  DNA用量更少，1 L FectoVIR ? -AAV 轉(zhuǎn)染試劑足以轉(zhuǎn)染 500 L 細(xì)胞培養(yǎng)物。

應(yīng)用數(shù)據(jù)

1、極高的病毒產(chǎn)量

?上圖：對比其他產(chǎn)品，FectoVIR?-AAV可提高10倍病毒產(chǎn)量

下圖：FectoVIR?-AAV通過高生產(chǎn)率大大降低制造成本。對在2000L STR中生產(chǎn)10E18的AAV進(jìn)行成本建模，基于

DSP后3O% AAV回收率，使用FectoVIR?-AAV生產(chǎn)10E18的AAV需要4個(gè)生物反應(yīng)器，使用PElpro ?需要7個(gè)生物反應(yīng)器，使用其他PEI需要22個(gè)生物反應(yīng)器。

2、更少的DNA用量

FectoVIR?-AAV在提高產(chǎn)量的同時(shí)可使DNA用量減少25%(+33% vs PEIpro?)

3、適合大規(guī)模生產(chǎn)

左圖：復(fù)合物工作體積：由10%減至1%。右圖：復(fù)合物穩(wěn)定性: 可延長至6小時(shí)

4、兼容多種商業(yè)化細(xì)胞培養(yǎng)基

使用在幾種合成培養(yǎng)基中制每的FectoVIR?-AAV/DNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染懸浮HEK-293T胞后72小時(shí)，收獲重組AAV-2。

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